| 根据GenBank 公布的伪狂犬病病毒GDSH 株(EF552427)的gE 基因序列设计1 对特异引物,对伪狂犬病病毒 Guizhou-DY 分离株的gE 基因进行PCR 扩增,将扩增产物克隆到pMD19-T 载体上,构建重组质粒pMD19-TgE636,经双酶切鉴定、核苷酸序列分析后,将gE 基因主要抗原表位区亚克隆到pET-32a(+) 原核表达载体上,成功构建原核表达质粒pET-32a(+)-gE636,并将其转化至BL21(DE3)中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳、Western blot 分析,得到了约42.7 ku 的条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化目的蛋白,将目的蛋白加入弗氏佐剂免疫小鼠,免疫后采血检测抗体,结果显示目的蛋白能诱导小鼠产生一定的抗体,该研究为伪狂犬病亚单位疫苗的研究奠定了基础。 |
